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为了尽量削减柱外死体积

2019-10-22  admin  阅读:

 

 

  正在两头柱接头内,柱管两头各放置一片不锈钢滤片(或滤网),用于封堵柱填料不被流动相冲出柱外而流失。空柱各组件均为316#不锈钢材质,能耐受一般的溶剂感化。但因为含氯化物的溶剂对其有必然的侵蚀性,故利用时要留意,柱及毗连管内不克不及长时间存留此类溶剂,以避免侵蚀。

  处置对于第一种环境改换进样阀垫圈;对于第二种环境加样针插到底,打针样品溶液后须快速、平稳地从LOAD形态转换到INJECT形态,以进样量的精确。日常工做中,液相色谱仪的调养很是主要,留意不要让空气进入输液系统和高压泵中,储液器内的溶液如长时间未用应清洗储液器并改换溶液,每次用完色谱仪后缓冲液要用纯水冲刷清洁,防止无机盐析出或堆积;样品的前处置也很主要,任何样品都要尽可能地去除杂质,完全消融,尽量削减对色谱柱的污染,以耽误色谱柱的利用寿命,同时避免打针过浓的样品溶液,免得残留液正在进样阀内析出固体惹起堵塞;色谱柱做好标识表记标帜,用于分歧阐发目标的色谱柱不要混用等。

  别的,固定相基质粒小,柱床极易达到平均、致密形态,极易降低涡流扩散效应。基质粒度小,微孔浅,样品正在微孔区内传质短。这些对缩小谱带宽度、提高分辩率是无益的。按照柱效理论阐发,基质粒度小,塔板理论数N就越大。这也进一步证明基质粒度小,会提高分辩率的事理。

  该系统包罗色谱柱、毗连管和恒温器等。色谱柱一般长度为10~50cm(需要两根连用时,可正在二者之间加连续接管),内径为2~5mm,由优良不锈钢或厚壁玻璃管或钛合金等材料制成,住内拆有曲径为5~10μm粒度的固定相(由基质和固定液形成).固定相中的基质是由机械强度高的树脂或硅胶形成,它们都有惰性(如硅胶概况的硅酸基因根基已除去)、多孔性(孔径可达1000?)和比概况积大的特点,加之其概况颠末机械涂渍(取气相色谱中固定相的制备一样),或者用化偶联各类基因(如磷酸基、季胺基、羟甲基、苯基、氨基或各类长度碳链的烷基等)或配体的无机化合物。因而,这类固定相对布局分歧的物质有优良的选择性。例如,正在多孔性硅胶概况偶联豌豆凝固素(PSA)后,就能够把成纤维细胞中的一种糖卵白分手出来。

  再者,高效液相色谱的恒温器可使温度从室温调到60C,通过改善传质速度,缩短阐发时间,就可添加层析柱的效率。

  反相柱:次要是以硅胶为基质,正在其概况键八烷基官能团(ODS)的非极性填料。也有无定型和球型之分。

  该系统包罗高压泵、流动相储存器和梯度仪三部门。高压泵的一般压强为l.47~4.4X10Pa,流速可调且不变,当高压流动相通过层析柱时,可降低样品正在柱中的扩散效应,可加速其正在柱中的挪动速度,这对提高分辩率、收受接管样品、连结样品的生物活性等都是有益的。流动相储存器和梯度仪,可使流动相随固定相和样品的性质而改变,包罗改变洗脱液的极性、离子强度、PH值,或改用合作性剂或变性剂等。这就可使各类物质(即便仅有一个基团的不同或是同分异构体)都能获得无效分手。

  柱接头采用低死体积布局,柱接头是两头螺纹组件,一端是为7/16英寸外螺纹,另一端是3/16英寸的内螺纹(国表里已规范化)。7/16英寸外螺纹取1/4英寸柱管(Φ6.35mm)毗连,两头放置压环用于密封。3/16英寸的内螺纹取1/16英寸(Φ1.57mm)的毗连管毗连,两头也放置压环用于柱接头的密封。为了尽量削减柱外死体积,正在安拆色谱柱时,用Φ1.57mm毗连管通过空心螺钉压环后要尽量插到底,然后再拧紧空心螺钉。压环被空心螺钉挤压变形后紧箍正在毗连管上(毗连管通过压环后显露的管长度应严酷节制正在2.5mm长或其他固定尺寸)。

  正相柱:多以硅胶为柱填料。按照外型可分为无定型和球型两种,其颗粒曲径正在3—10 µm的范畴内。另一类正相填料是硅胶概况键合—CN,-NH2等官能团即所谓的键合相硅胶。

  液相色谱仪按照固定相是液体或是固体,又分为液-液色谱(LLC)及液-固色谱(LSC)。现代液相色谱仪由高压输液泵、进样系统温度节制系统色谱柱检测器、信号记实系统等部门构成。取典范液相柱色谱安拆比力,具有高效、快速、活络等特点。

  缘由系统中有空气或者单向阀的宝石球和阀座之间夹有异物,使得两者不克不及密封。处置工做中留意察看流动相的量,不锈钢滤器沉入储液器瓶底,避免吸入空气,流动相要充实脱气。如为单向阀和阀座之间夹有异物,拆下单向阀,放入盛有丙酮的烧杯用超声波清洗。

  流动相内有气泡,封闭泵,打开泄压阀,打开purg键,清洗脱气,气泡不竭从过滤器冒出,进入流动相,无论打开purge键几回,都无法断根不竭发生的气泡。缘由过滤器持久沉浸于乙酸铵等缓冲液内,过滤器内部因为霉菌的发展繁衍,构成菌团,堵塞了过滤器,缓冲液难以流利地通过过滤器,空气正在泵的压力感化下颠末滤器进入流动相。处置过滤器浸泡于5%硝酸溶液中,超声清洗几分钟即可;亦可将过滤器浸泡于5%硝酸溶液中12~36小时,悄悄震动几回,再将过滤器用纯水清洗几回,打开泄压阀,打开purge键清洗脱气,如仍有气泡不竭从过滤器冒出,继续将过滤器浸泡于5%硝酸溶液中,如没有气泡不竭从过滤器中冒出,申明过滤器内部的霉菌菌团已被硝酸,流动相能够流利地通过过滤器。打开泄压阀,打开泵,流速调至1.0~3.0ml/min,纯水冲刷过滤器1小时摆布。即可将过滤器清洗清洁。封闭泄压阀,纯甲醇冲刷半小时即可。

  处置对于第一种环境,改换密封垫圈;对于第二种环境,正在泵感化的同时,用一个50ml的玻璃针筒正在泵的出口处帮帮抽出空气。

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  高效液相色谱法只需求样品能制成溶液,不受样品挥发性的,流动相可选择的范畴宽,固定相的品种繁多,因此能够分手热不不变和非挥发性的、离解的和非离解的以及各类量范畴的物质。取试样预处置手艺相共同,HPLC所达到的高分辩率和高活络度,使分手和同时测定性质上十分附近的物质成为可能,可以或许分手复杂相体中的微量成分。跟着固定相的成长,有可能正在充实连结生化物质活性的前提下完成其分手HPLC成为处理生化阐发问题最有前途的方式。因为HPLC具有高分辩率、高活络度、速度快、色谱柱可频频操纵,流出组分易收集等长处,因此被普遍使用到生物化学、食物阐发、医药研究、阐发、无机阐发等各类范畴。高效液相色谱仪取布局仪器的联用是一个主要的成长标的目的。液相色谱-质谱连用手艺遭到遍及注沉,如阐发氨基甲酸酯农药和多核芳烃等;液相色谱-红外光谱连用也成长很快如正在污染阐发测定水中的烃类,海水中的不挥发烃类,使污染阐发获得新的成长。

  b、柱填料:液相色谱柱的分手感化是正在填料取流动相之间进行的,柱子的分类是根据填料类型而定。

  一般采用隔阂打针进样器或高压进样间完成进样操做,进样量是恒定的。这对提高阐发样品的反复性是无益的。

  处置对于第一种环境先用40~50℃的纯水,低速正向冲刷柱子,待柱压逐步下降后,响应提高流速冲刷,柱压大幅度下降后,用常温纯水冲刷,之后用纯甲醇冲刷柱子30分钟;对于第二种环境,由样品的堆积惹起污染的C18柱,和纯水反向冲刷柱子,换成甲醇冲刷,接着用甲醇+异丙醇(4+6)冲刷柱子,再用换成甲醇冲刷,然后用纯水冲刷,最初甲醇冲刷正向冲刷柱子30分钟以上。

  处置对于第一种环境,先用纯水反向冲刷柱子,然后换成甲醇冲刷,接着用甲醇+异丙醇(4+6)冲刷柱子(冲刷时间的长短由样品污染的环境而定),再换成甲醇冲刷,然后用纯水冲刷,最初甲醇冲刷正向冲刷柱子30分钟以上。如冲刷后仍然出峰欠安,则考虑第二种环境。对于第二种环境,拧开柱头,查抄柱填料能否硬结或塌陷。去除硬结部门(污染的填料),拆入新填料,滴一滴甲醇,填料下陷,再填,用取柱内径不异的顶端滑润的不锈钢杆压紧,再填平,滴甲醇,再压紧频频几回,曲至拆满填平。柱头用甲醇冲刷清洁,擦净柱外壁的填料,拧紧柱头,用纯甲醇冲刷30分钟以上。

  的流动相被高压泵打入系统,样品溶液经进样器进入流动相,被流动相载入色谱柱(固定相)内,因为样品溶液中的各组分正在两相中具有分歧的分派系数,正在两相中做相对活动时,颠末频频多次的吸附-解吸的分派过程,各组分正在挪动速度上发生较大的不同,被分手成单个组分顺次从柱内流出,通过检测器时,样品浓度被转换成电信号传送到记实仪,数据以图谱形式打印出来高效液相色谱仪次要有进样系统、输液系统、分手系统、检测系统和数据处置系统,下面将别离论述其各自的构成取特点。

  操纵夹杂物正在液-固或不互溶的两种液体之间分派比的差别,对夹杂物进行先分手,尔后阐发判定的仪器。

  c、 按柱管上标示的流动相流向,将色谱柱的入口端通过毗连管取进样阀出口相毗连(如前提答应,正在柱前利用柱);柱的出口取检测器毗连。毗连管是外径为1.57mm、内径为0.1-0.3mm的不锈钢管。毗连管的两头均有空心螺钉及密封用压环。正在接管时必然要设法降低柱外死体积。毗连管通过空心螺钉、压环后尽量用力插到底,然后顺时针拧紧空心螺钉,DS视讯,曲到拧不动为止,再用扳手继续顺时针拧1/4-1/2圈,不要用力过大。如色谱柱通过流动相加压后有漏液现象,请用扳手继续顺时针拧1/4圈,曲至不漏液为止。